鼠尾膠原實驗應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式，為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細胞，培養(yǎng)7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻，平均厚度約為1mm；HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開；掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規(guī)則多角形，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接；同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立，為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。南京正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦

鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法。方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細胞,培養(yǎng)7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率。結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規(guī)則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的。結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。長沙正規(guī)鼠尾膠原哪家便宜將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上，pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液（均需要無菌、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一般不用)，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構(gòu)建，對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實驗組）和普通培養(yǎng)皿（對照組）中，并且均用0，10，100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài)，應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細胞存活率，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài)，流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞凋亡率，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平，Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱。

使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間。2、三維膠原凝膠的制備：A、無細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。開蓋在超凈臺上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時后。寧波鼠尾膠原哪家好

使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。南京正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開，去掉皮毛，并剪成小段，抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。南京正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦

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